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高效液相色谱仪 色谱仪应用 液相色谱仪方法
4-甲基咪唑的液相色谱(HPLC)检测方案
1、仪器与试剂
1．1仪器、设备
高效液相色谱仪等度系统， 色谱柱：150mm×4.6mm×5μm；分析天平；旋转蒸发仪；分液漏斗250ml；振荡器；针头过滤器；微孔滤膜：0.45µm
1.2试剂
甲醇（色谱纯）；无水乙醇；三氯甲烷；三氯甲烷-无水乙醇萃取液（80: 20)：移取80 mL的三氯甲烷及20 mL的无水乙醇混合均匀备用。碳酸钠。碳酸钠溶液（100 g/L )：准确吸取碳酸钠100 g于1 000 mL容量瓶中，用水定容至刻度。庚烷磺酸钠，磷酸二氢钾，磷酸；磷酸二氢钾缓冲液（0.05mol/L）：称取磷酸二氢钾6.8g，庚烷磺酸钠1g于1000ml容量瓶中，加水900ml，用稀磷酸调pH至3.5，用水定容至1000ml。4-甲基咪唑标准品：纯度>99 %o4-甲基咪唑标准储备溶液：准确称取0. 1 000 g 4-甲基咪唑于100 mL的容量瓶中，用流动相溶解定容至刻度。4-甲基咪唑含量1. 0 mg/mL，作为贮备溶液。
2、试样溶液的制备
准确称取3g样品（精确至0. 001 g)，加15mL水溶解，移入250 mL分液漏斗中，加100 g/L碳酸钠溶液15 mL，加三氯甲烷-无水乙醇萃取液60 mL，剧烈振摇5 min。静置分层后，将有机相移入另一分液漏斗中，水相再按同样方法萃取一次，合并有机相；用100 g/L碳酸钠溶液洗涤提取液3次，每次30mL。然后将有机相通过无水硫酸钠滤入旋转蒸发瓶中，50℃浓缩至近干，取下，以水溶解残渣并定容至10ml，经0.45µm微孔膜过滤后供HPLC分析。
3、色谱条件
色谱柱：C18, 4. 6 mmx250 mm，粒度5 µm
流动相：甲醇: 0. 05 mol/L磷酸二氢钾缓冲液（(pH 3.5，含0. 1％庚烷磺酸钠）=5: 95
波长：210nm
流速：1. 0 mL/min
4、样品测定
标准曲线：将4-甲基咪唑标准溶液配置成一系列标准溶液，分别进标准系列溶液各10µL，进行HPLC分析，然后以峰面积为纵坐标，以4-甲基咪唑的含量为横坐标，绘制标准曲线。
样品测定：吸取10 µL试样溶液进行HPLC分析，测定其峰面积，从标准曲线查得测定液中4-甲基咪唑的含量
5、4-甲基咪唑的标准色谱图
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